沉降菌和浮游菌監(jiān)測作為潔凈環(huán)境（特別是藥企）日常生產(chǎn)過程中微生物監(jiān)測的兩種方式，一直在被大家廣泛使用。

那它們究竟有什么區(qū)別呢？讓我們一起來了解吧！

GMP(2010)潔凈室(區(qū))微生物監(jiān)測的動態(tài)標(biāo)準(zhǔn)

行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)要求

GMP對于制藥行業(yè)內(nèi)測試方法需要參照ISO的測試方法，而ISO14698-1微生物污染控制法規(guī)提到微生物監(jiān)測需要評估收集效率，高收集效率的采樣方法和采樣設(shè)備可以得到更有代表性的數(shù)據(jù)。對于生物負(fù)載環(huán)境低的環(huán)境，如A、B級環(huán)境，應(yīng)當(dāng)更多地采用主動采樣的浮游菌采樣器，而不是被動采樣的沉降菌方法。ISO14698-1 附錄中對于微生物采樣器的收集效率提出了進(jìn)行收集效率評估的指導(dǎo)意見。

現(xiàn)行2003版的ISO14698對于收集效率分為物理收集效率和生物收集效率，其中物理收集效率更在意的是采樣方法是否有能力收集到空氣的攜菌粒子，而生物收集效率更在意的是采樣器或者采樣方法是否能在收集到的同時保證該攜菌粒子的存活率。

廠家有義務(wù)和有責(zé)任提供基于以上兩種收集效率的驗證文件。如果廠家無法提供，制藥企業(yè)需要開發(fā)相關(guān)的方法驗證證明其使用方法的收集效率。通常認(rèn)為，以上兩種收集效率要達(dá)到一定的靈敏度以上方可使用。

沉降菌的采樣效率

解決了上述微生物采樣器的采樣效率驗證，我們又回到了沉降菌的采樣效率評估。這是業(yè)內(nèi)的痛點(diǎn)，因為我們都知道沉降菌的采樣方法屬于被動采樣方式，回收率相當(dāng)?shù)停瑹o法進(jìn)行方法驗證。基于地心引力的自然被動采樣方式，能夠得到12微米粒徑的活性粒子沉降到9cm的采樣平皿上的收集效率為0.106CFU/h，沉降到14cm的采樣平皿上的收集效率為0.256CFU/h。對于1微米粒徑的活性粒子沉降到9cm的采樣器皿上的收集效率為0.008CFU/h 。如果級別區(qū)最大濃度限度為1CFU/m3, 那么一個9cm平皿需要暴露于級別區(qū)采樣1250小時（相當(dāng)于52天），才能在低生物污染負(fù)載環(huán)境檢測到一個有意義的數(shù)據(jù)（一個CFU）。

科學(xué)家得到結(jié)論：沉降菌“是一種太不靈敏的采樣方法"，以及“沉降菌更好的反映了攜菌粒子的沉積效果，僅在較大平皿采樣（如14cm）或者多個采樣平皿采集時靈敏些"。科學(xué)家發(fā)現(xiàn)主動采樣方法采集1微米的粒子的收集效率比9cm的被動采集的沉降菌方法的效率高2250倍。對于級別區(qū)層流環(huán)境的微生物采樣，建議采用更加靈敏的采樣方法。沉降菌等采樣方法對于相對微生物負(fù)載量較高的非無菌工藝的C，D級環(huán)境，可以作為一個微生物采樣的補(bǔ)充，配合浮游菌采樣方法可以一起使用。對于A，B級環(huán)境，浮游菌采樣方法作為更高效的采樣方法更適合。

日常監(jiān)測中的風(fēng)險

在我們平常的工作中，往往會面臨兩難的局面。相關(guān)監(jiān)管部門對于微生物和風(fēng)險的要求重視程度達(dá)到的高度；但他們又認(rèn)為采用不恰當(dāng)?shù)牟蓸臃椒〞ιa(chǎn)環(huán)境帶來負(fù)面影響。之前，很多企業(yè)由于無法找到一個合適的微生物方法，擔(dān)心浮游菌采樣方法的平皿頻繁更換會對制藥環(huán)境帶來污染，因此決定不進(jìn)行主動微生物（浮游菌）監(jiān)測。

隨著現(xiàn)代制藥工業(yè)發(fā)展，我們已經(jīng)認(rèn)識到了需要提升我們對于微生物采樣方法的風(fēng)險評估和風(fēng)險識別。沉降菌方法可能會對于環(huán)境造成污染，我們知道沉降菌表面有大量的營養(yǎng)水分，在10微米至20微米之間，當(dāng)沉降菌暴露在關(guān)鍵生產(chǎn)的級別環(huán)境中，這些營養(yǎng)水分很可能會被吹到無菌表面，藥瓶容器內(nèi)，藥液當(dāng)中，造成污染和交叉污染。浮游菌采樣由于培養(yǎng)基比較容易干燥，現(xiàn)代的采樣流速設(shè)計為低流速采樣，可以盡量的延長浮游菌采樣的覆蓋生產(chǎn)的時間，無需頻繁進(jìn)行平皿更換。通常會考慮到級別層流環(huán)境的氣流保護(hù)的目的，我們對浮游菌采樣也要進(jìn)行等動力采樣設(shè)計，確保采樣器上方的空氣呈現(xiàn)等速采樣，不會對現(xiàn)場造成污染。傳統(tǒng)方法把采樣器放入級別，由于采樣器內(nèi)部的線路板電氣部件無法進(jìn)行*的滅菌，通常企業(yè)采樣VHP或者酒精消毒采樣器表面，無法到達(dá)*的滅菌的效果。

WHO無菌工藝控制要求中建議制藥企業(yè)應(yīng)當(dāng)采用分體式的微生物采樣方法，即把采樣頭和采樣器進(jìn)行分離，采樣頭放入級別并可提前進(jìn)行高溫或者化學(xué)滅菌，而采樣器放在B級背景環(huán)境進(jìn)行操作。這樣可以規(guī)避采樣器無法*滅菌對于級別區(qū)的影響。

現(xiàn)在的浮游菌采樣器的內(nèi)置軟件可設(shè)置對所有的采樣過程進(jìn)行監(jiān)控，并生成不可更改的監(jiān)測記錄，方便進(jìn)行追蹤。而沉降菌的采樣更依賴于紙質(zhì)記錄管理，流轉(zhuǎn)中的管理風(fēng)險較大。

結(jié)論

綜上而述，經(jīng)過效率驗證的浮游菌采樣方法對比沉降菌采樣方法的收集效率更為高效，適合用于關(guān)鍵的，生物負(fù)載低的無菌生產(chǎn)環(huán)境。沉降菌采樣方法可作為一種生產(chǎn)過程中浮游菌采樣的補(bǔ)充方法，可用于相對不關(guān)鍵，生物負(fù)載高的非無菌環(huán)境，使用時需要避免放置位置不當(dāng)或者操作錯誤而造成的污染風(fēng)險。

無論采用何種方法，都應(yīng)當(dāng)基于生產(chǎn)工藝的風(fēng)險評估來確定位置，采樣頻率，采樣覆蓋時間以及采樣流速等。沉降菌和浮游菌作為制藥生產(chǎn)過程中的監(jiān)測方法，我們應(yīng)當(dāng)基于風(fēng)險評估來選擇和考慮采用哪一種方法。現(xiàn)代的無菌制藥控制對于關(guān)鍵區(qū)微生物采樣更傾向于主動采樣方式（浮游菌），而不是低靈敏度的被動采樣方法（沉降菌），需要重視采樣方法對于生產(chǎn)環(huán)境的影響，提高無菌工藝控制水平和基于風(fēng)險評估的科學(xué)方法。